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胚胎冷冻保存是将胚胎保存在—196~C超低温的液氮中做长期保存。可使胚胎移植不受时间地点的限制，从而达到提高胚胎移植效率，长期保存优良基因的目的。今天，我们就来介绍下现有的胚胎冷冻方法。

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现有的胚胎冷冻方法有三种：

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①常规冷冻法：也叫慢速冷冻法、逐步降温法。将采集到的胚胎用培养液洗涤后置入有不同冷冻保护剂(甘油或二甲亚枫(DMSO)等)浓度的三种冷冻液中(冷冻液浓度由低到高，终浓度1.4M恩施试管婴儿的培育及胚胎移植技术)，每种冷冻液中平衡5分钟，然后将胚胎和冷冻液装入细管中封口、标记，放入冷冻仪中进行冷冻。冷冻速率先以1～3~C/分下降至-6～-7℃，在此温度诱发结晶，平衡10分钟，然后，以0.3℃/分的速率降温至-35～,38℃，之后投入液氮中保存。胚胎解冻后，需按胚胎进入冷冻液时的相反浓度，即从高到低浓度脱除冷冻保护剂，每步5分钟，后置入含20%血清的PBS保护液中洗涤3次，**脱除冷冻保护剂。或者将解冻后的胚胎放入0.5M(或1.0M)的蔗糖溶液中平衡10分钟，再用上述PBS液洗涤3次。

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②一步冷冻法：也叫一步细管法。该方法是由慢速冷冻法改进而来，细管内的冷冻液和蔗糖液是分开的，因此，在细管内用蔗糖液可一步脱除甘油抗冻剂，从而利于在生产中推广应用。

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③玻璃化冷冻法：是近年来发展起来的一种新的方法。将胚胎在适当的冷冻保护剂混合液中作短暂处理后，直接投入液氮。冷冻保护剂在急剧降温到很低温度时能被浓缩而不结晶，而且液体的粘性增强，由液态变为透明的固态，形成玻璃化。用这种方法冷冻，无需冻前分步添加抗冻剂和冻后分步脱除抗冻剂的繁琐步骤，简化了冷冻过程，是一种简便、快速、有效的冷冻方法，不需要冷冻仪器。

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